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色谱柱使用及维护

作者: 来源: 浏览数:2335 发布时间:2010-5-16 0:00:00

色谱柱使用及维护

 

 

 

卡套柱的安装(加预柱)

1. 将卡套架套入柱芯

2. 将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽,使夹套高于柱芯(见左图1

3. 将已套到柱芯上的卡套架向上推,直至高过夹套片

4. "子弹头"预柱放入卡套片内

5. 将卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手拧紧

6. 然后依同样的顺序连接好柱子的另一端

7. 连接到液相色谱仪,PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用专用扳手

 

更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片(同时可以修补色谱柱)

注意:在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前,应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗,而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈,以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。

1. 将修补工具中的2套入柱芯的顶端

2. 将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中,并顺时针方向旋转到旋紧

3. 一手握柱芯,另一只手轻轻地向外拉3,取出柱芯顶端的滤网

4. 用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料

5. 将新的填料用甲醇润湿,然后填入挖去的部位,压平

6. 照(左图3)装上新的玻璃棉滤网,并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端

7. 柱芯顶端套上2,然后参照(左图3)将滤网放入

8. 压紧,然后取下2,再用4将滤网的边缘压平

 

平衡色谱柱

反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉,因此在用流动相分析样品之前,应使用1020倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱;如果您所使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水"过渡"

硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相,请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡

 

如何平衡色谱柱?

平衡过程中,将流速缓慢地提高

用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低,则需要较长的时间来平衡)

 

色谱柱的再生

进行色谱柱再生时,应使用一个谦价的泵,我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。

1 建议用来冲洗的溶剂体积

色谱柱尺寸  柱体积  所用溶剂的体积

125-4     1.6ml   30ml

250-4     3.2ml   60ml

250-10    -20ml    400ml

 

请根据下表选择您的再生方法:

极性固定相(如SiNH2*DIOL基色谱填料)的再生:

正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**

非极性固定相(如反相色谱填料RP18RP8CN等)的再生:

水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水

0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱

 

注意:

在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能成铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。

**如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。

 

色谱柱的维护

1. 使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)

2. 大多数反相色谱柱的pH稳定范围是27.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围

3. 避免流动相组成及极性的剧烈变化

4. 流动相使用前必须经脱气和过滤处理

5. 如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存大乙腈中

6. 压力升高是需要更换预柱的信号

 

 

 

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